Cystinosin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429900
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Cystinosin O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Cystinosin, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Cystinosin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-429900 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Ctns codifica a cistinósina, um transportador lisossomal de cistina acionado por H+ que medeia o efluxo de cistina do lúmen lisossomal para o citosol, conectando o transporte lisossomal ao equilíbrio redox celular e à homeostase de aminoácidos. A perda da atividade da cistinósina compromete a função lisossomal, promove o acúmulo de cistina e altera vias envolvidas na dinâmica autofagia–lisossomo, nas respostas ao estresse oxidativo e na adaptação metabólica. Em modelos murinos, a desrupção de Ctns é amplamente utilizada para modelar os mecanismos subjacentes aos fenótipos de armazenamento de cistina e para examinar como defeitos no transporte lisossomal remodelam a sinalização de estresse celular. Esses processos são relevantes para compreender como redes de tráfego e degradação centradas no lisossomo influenciam a homeostase tecidual em tipos celulares relevantes para rim, olho e sistema imune.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Cystinosin (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ctns em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ctns, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ctns na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Cystinosin.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ctns para a investigação da sinalização de Cystinosin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ctns críticos para a função Cystinosin
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ctns para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Cystinosin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Cystinosin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ctns. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Cystinosin Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Cystinosin (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ctns para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ctns definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.