cystatin DCRISPR激活质粒(h): sc-405049-ACT

CST5 编码半胱天蛋白酶抑制剂D（cystatin D），这是一种分泌型的2型半胱天蛋白酶抑制剂，可抑制乳头蛋白酶样（papain-like）的半胱氨酸蛋白酶（如组织蛋白酶cathepsins），从而帮助调控细胞外与细胞内的蛋白水解过程。通过调节蛋白酶活性，cystatin D 有助于维持上皮稳态、参与细胞外基质重塑、影响抗原加工以及炎症信号传导，从而可能影响细胞分化与屏障功能。在肿瘤生物学、黏膜炎症和组织重塑等背景中，已有研究报道 CST5 表达改变以及 cathepsin–cystatin 失衡现象，因此它与研究蛋白稳态（proteostasis）和微环境调控密切相关。作为一种在人类多个上皮组织区室中表达的蛋白，cystatin D 常被用于研究与侵袭相关的蛋白水解调控通路以及应激反应型的转录程序。

cystatin D CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CST5的表达。

cystatin D CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CST5基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CST5转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性cystatin D表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CST5位点，并能够研究内源性位点上依赖于cystatin D的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CST5表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟cystatin D通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。