CYPOR Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422345-ACT

O gene **Por** de camundongo codifica a **citocromo P450 oxidorredutase (CYPOR)**, uma flavoproteína de membrana do retículo endoplasmático (RE) que transfere elétrons do NADPH para enzimas citocromo P450 microssomais e outros parceiros redox. Ao permitir os ciclos catalíticos das P450, a CYPOR sustenta o metabolismo oxidativo de lipídios e esteroides endógenos, bem como a biotransformação de xenobióticos, ligando a atividade de **Por** à desintoxicação hepática, à homeostase redox e a redes metabólicas associadas ao RE. A alteração da função da CYPOR perturba vias dependentes de P450 e pode deslocar o equilíbrio de espécies reativas de oxigênio, tornando **Por** uma variável-chave em modelos de estresse metabólico e de fenótipos relacionados à farmacologia. Na pesquisa biomédica, **Por** é frequentemente estudado para dissociar as exigências de transferência de elétrons das P450 de efeitos específicos de substrato e para mapear relações entre genótipo e metabólitos em diferentes tecidos.

CYPOR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Por sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYPOR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Por em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Por, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYPOR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Por nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYPOR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYPOR em células tumorais com expressão de Por silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.