CyPA Double Nickaseプラスミド (h): sc-418155-NIC

PPIAはシクロフィリンA（CyPA）をコードしており、CyPAは細胞質および核内に広く存在するペプチジルプロリルcis–trans異性化酵素として、タンパク質のフォールディングや構造変換を加速します。CyPAはプロテオスタシス（タンパク質恒常性）とストレス応答性シグナル伝達を調節し、シャペロン関連経路をはじめ、アポトーシス、炎症、細胞周期進行に影響するキナーゼや転写因子の活性制御にも関与します。CD147/BSGなどの相互作用パートナーや多様な標的タンパク質との結合を介して、CyPAは白血球のトラフィッキングや酸化ストレス応答を形成し、心血管疾患、神経炎症、腫瘍関連プロセスとの関連が示されています。PPIAの発現量やCyPA活性の変化は複数の疾患状況で報告されており、シグナル伝達、タンパク質恒常性、宿主—病原体相互作用の機構研究における有用な標的となっています。

CyPA ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PPIA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PPIA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PPIAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PPIAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。