CYP4X1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-429886-LAC

Cyp4x1 codifica a enzima do citocromo P450 CYP4X1, uma monooxigenase associada à membrana implicada no metabolismo de ácidos gordos e eicosanoides, incluindo a oxidação de lípidos derivados do ácido araquidónico que podem modular a sinalização inflamatória e a homeostase vascular ou neuronal. Como parte da via oxidativa mais ampla do P450, a atividade da CYP4X1 influencia o equilíbrio redox celular e a disponibilidade de mediadores lipídicos, ligando-a a processos como respostas ao stress oxidativo e comunicação intercelular. Em tecidos de rato, a expressão de Cyp4x1 tem sido reportada em contextos enriquecidos no cérebro, sustentando a investigação sobre redes de sinalização lipídica relevantes para a neuroinflamação e a regulação neurovascular. Alterações na regulação de enzimas P450 que metabolizam lípidos são frequentemente estudadas em modelos de perturbações metabólicas e inflamatórias, tornando o Cyp4x1 um nó útil para estudos mecanísticos centrados em vias.

As Partículas de Ativação Lentivirais CYP4X1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Cyp4x1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CYP4X1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Cyp4x1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CYP4X1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Cyp4x1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.