CYP2A7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403449-ACT

ヒトCYP2A7は、ミクロソーム薬物代謝ネットワーク内で、内因性基質および多様な外因性化学物質（ゼノバイオティクス）の酸化的代謝に関与するシトクロムP450モノオキシゲナーゼをコードする。CYP2ファミリーの一員として、CYP2A7はNADPH–シトクロムP450還元酵素とのレドックスサイクリングに関与し、下流の抱合およびクリアランス経路に影響を及ぼす第I相生体内変換プロセスを支える。CYP2A遺伝子座の活性の違いは、代謝能や生体内活性化能を調節し得るため、化学物質感受性、毒性物質への応答、ならびに個体間の代謝差に関する研究において重要である。したがってCYP2A7の発現は、生理条件およびストレス条件下における経路制御を理解するため、肝臓やその他の代謝活性の高い組織で一般に評価される。

CYP2A7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYP2A7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CYP2A7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYP2A7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYP2A7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CYP2A7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYP2A7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCYP2A7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYP2A7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCYP2A7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。