CYP1A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401178

概要

CYP1A2は、ミクロソーム局在のチトクロームP450モノオキシゲナーゼをコードしており、多様な外因性化合物（ゼノバイオティクス）および内因性基質の酸化的代謝を触媒することで、肝臓での薬物クリアランスや化学物質の解毒に寄与します。その転写は、芳香族炭化水素受容体（AHR）シグナル伝達などのゼノバイオティクス感知経路によって制御され、また酵素活性はNADPH–P450還元酵素との共役を介してレドックス恒常性とも関連します。CYP1A2における遺伝的要因および環境要因の変動は代謝能を変化させ得るため、有害な薬物反応への感受性や、発がん前駆物質（プロカルシノゲン）に対する感受性の違いに影響を及ぼします。このためCYP1A2は、薬理ゲノミクス、毒性学、ならびに肝特異的代謝機能モデルの分野で頻繁に研究対象となっています。

CYP1A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCYP1A2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CYP1A2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CYP1A2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CYP1A2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CYP1A2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CYP1A2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CYP1A2の機能に不可欠なCYP1A2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CYP1A2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CYP1A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCYP1A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CYP1A2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CYP1A2 HDRプラスミド（h）および CYP1A2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCYP1A2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCYP1A2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。