CYP11B1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403040-NIC

CYP11B1は、副腎皮質におけるコルチゾールおよびコルチコステロン生合成に必須な11β-水酸化反応を触媒する、ミトコンドリア局在性のシトクロムP450酵素をコードしています。ステロイド産生経路の一部として、CYP11B1はコレステロールの動員やミトコンドリア電子伝達系の下流で機能し、ACTH（副腎皮質刺激ホルモン）による調節を受けたグルココルチコイド産生の制御に組み込まれています。CYP11B1活性の変化は、グルココルチコイドの恒常性や副腎ステロイドのフラックスを乱し、コルチゾール産生異常と、それに伴うミネラルコルチコイド系・アンドロゲン系の代償的変化を特徴とする疾患に関連します。そのためCYP11B1は、副腎細胞モデルにおいて、ステロイド産生、ミトコンドリアP450触媒反応、ならびに内分泌性ストレス応答シグナル伝達を解析する目的で広く研究されています。

CYP11B1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CYP11B1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CYP11B1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CYP11B1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CYP11B1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。