CYP11A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401269-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CYP11A1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CYP11A1 Double Nickase Plasmid (h) e il CYP11A1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CYP11A1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CYP11A1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401269-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP11A1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401269-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP11A1 codifica l’enzima mitocondriale citocromo P450 a scissione della catena laterale (P450scc), che catalizza la conversione del colesterolo in pregnenolone, primo passaggio e fase limitante la velocità della biosintesi degli ormoni steroidei. Questa reazione avvia la produzione di glucocorticoidi, mineralcorticoidi e steroidi sessuali e si integra con il trasporto mitocondriale del colesterolo e con le vie dei partner redox che coinvolgono ferredossina e ferredossina reduttasi. L’attività di CYP11A1 è centrale nei programmi steroidogenici della corteccia surrenalica e dei tessuti gonadici, collegandosi all’omeostasi endocrina e agli stati di differenziazione cellulare. Alterazioni dell’espressione o della funzione di CYP11A1 sono associate a disordini congeniti della biosintesi degli steroidi, a fenotipi di insufficienza surrenalica e a una deregolazione della segnalazione steroidogenica studiata in modelli di malattie riproduttive e surrenaliche.
CYP11A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYP11A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYP11A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYP11A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYP11A1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.