Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
cyclin D2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401236-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- cyclin D2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il cyclin D2 Double Nickase Plasmid (h) e il cyclin D2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CCND2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: cyclin D2 Antibody (B-6): sc-376676
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
cyclin D2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401236-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cyclin D2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401236-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCND2 codifica la ciclina D2, partner regolatorio di CDK4/6 che promuove la progressione della fase G1 favorendo la fosforilazione della proteina del retinoblastoma e la trascrizione dipendente da E2F. La ciclina D2 integra segnali mitogenici provenienti da vie come PI3K–AKT e RAS–MAPK per coordinare l’ingresso nel ciclo cellulare, la proliferazione e programmi di differenziamento dipendenti dal contesto. Alterazioni del dosaggio o della regolazione di CCND2 possono perturbare i checkpoint G1/S, influenzando la stabilità del genoma e la capacità proliferativa. La deregolazione della segnalazione della ciclina D2 è stata associata a fenotipi di crescita anomali ed è oggetto di studio in ambito oncologico, nei disturbi dello sviluppo e in modelli di linee endocrine e neurali, in cui il controllo dell’asse CDK4/6–RB è cruciale.
cyclin D2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CCND2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CCND2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CCND2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CCND2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.