cyclin D1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400047-ACT

CCND1はサイクリンD1をコードしており、G1/S期の細胞周期移行を司る中核的な制御因子です。サイクリンD1はCDK4/6に結合してそれらを活性化し、RBファミリータンパク質のリン酸化を促進することで、E2F依存性転写の解除を引き起こします。MAPK/ERKやPI3K/AKTなどの経路からの増殖シグナルを統合することで、サイクリンD1は増殖刺激と細胞周期への進入を協調させ、DNA複製やチェックポイント応答の制御にも寄与します。CCND1の発現異常や増幅は、多様ながんにおいて異常増殖やゲノム不安定性としばしば関連しており、サイクリンD1活性の変化は分化プログラムや細胞代謝の変動とも結び付けられています。転写応答性の高い細胞周期ノードとして、CCND1はヒト細胞モデルにおける「シグナル伝達—増殖」連関や、がん遺伝子経路への依存性を解析するために広く利用されています。

cyclin D1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CCND1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

cyclin D1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CCND1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCCND1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性cyclin D1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCCND1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcyclin D1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCCND1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcyclin D1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。