CUL-4A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430261

Panoramica

Il gene murino **Cul4a** codifica **CUL-4A**, una proteina scaffold della famiglia delle culline che assembla complessi di ligasi E3 dell’ubiquitina **CUL4–DDB1** per indirizzare l’ubiquitinazione e la degradazione proteasomiale di regolatori chiave della dinamica della cromatina e della stabilità del genoma. CUL-4A partecipa al riconoscimento del danno al DNA e alla segnalazione di riparazione, inclusi la riparazione per escissione di nucleotidi e i processi associati alla replicazione, e contribuisce a coordinare la progressione del ciclo cellulare tramite degradazione proteica regolata. Modellando la proteostasi a livello della cromatina, CUL-4A influenza programmi trascrizionali e risposte dei checkpoint in condizioni di stress genotossico. Una ubiquitinazione dipendente da CUL4A deregolata è stata collegata a fenotipi di proliferazione aberrante e instabilità genomica, rendendo **Cul4a** un bersaglio utile per studi meccanicistici di vie oncogeniche in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CUL-4A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cul4a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cul4a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cul4a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CUL-4A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cul4a per lo studio della segnalazione di CUL-4A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cul4a critici per la funzione di CUL-4A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cul4a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CUL-4A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CUL-4A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cul4a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CUL-4A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CUL-4A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cul4a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cul4a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.