CTDSPL2 Particelle di Attivazione Lentivirale (m2): sc-435953-LAC-2

Il gene murino Ctdspl2 codifica CTDSPL2, una fosfatasi nucleare della famiglia haloacid dehalogenase (HAD) implicata nella regolazione trascrizionale attraverso la defosforilazione di residui di serina all’interno del dominio C-terminale dell’RNA polimerasi II, influenzando così programmi di espressione genica legati al controllo del ciclo cellulare e alla differenziazione. CTDSPL2 si colloca all’interno di reti di segnalazione mediate da fosfatasi che coordinano processi associati alla cromatina, l’elaborazione dell’RNA e gli output delle vie di sviluppo nelle cellule dei mammiferi. La disregolazione dell’attività fosfatasica diretta al CTD è ampiamente rilevante in modelli di stress proliferativo e di alterata determinazione di linea cellulare, rendendo Ctdspl2 un bersaglio utile per studiare i meccanismi di controllo trascrizionale dipendenti dalla fosforilazione. L’editing genetico di Ctdspl2 in sistemi murini consente l’analisi funzionale dell’attività delle fosfatasi nucleari, la mappatura delle conseguenze trascrizionali a valle mediante saggi RNA-seq/ChIP e la dissezione delle interazioni tra vie di segnalazione in linee cellulari ingegnerizzate o in modelli genetici in vivo.

Le particelle di attivazione lentivirale CTDSPL2 (m2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Ctdspl2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CTDSPL2 (m2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Ctdspl2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CTDSPL2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Ctdspl2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.