CTDSPL2 CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-435953-ACT-2

マウスCtdspl2はCTDSPL2をコードしており、CTDSPL2はハロ酸デハロゲナーゼ（HAD）ファミリーに属するMg2+依存性ホスファターゼとして、リン酸化セリン／スレオニンの脱リン酸化に関与するとともに、RNAポリメラーゼIIのC末端ドメイン（CTD）のリン酸化ダイナミクスを調節することで転写制御に寄与する。CTDSPL2は、リン酸化依存的なシグナル伝達と遺伝子発現プログラムを調整し、細胞周期の進行、分化、系譜決定に影響を与えることで細胞状態の転換に関与し、クロマチン関連の転写制御を担う経路とも統合される。CTDホスファターゼ活性および関連する転写回路の破綻は、がん化や発生異常の表現型と関連づけられており、Ctdspl2は疾患モデルにおけるリン酸化駆動型の転写ネットワークを解明するための有用な遺伝子座となる。マウス細胞でCtdspl2を遺伝子編集することは、CTDリン酸化制御、ホスファターゼ—基質関係、ならびに増殖・分化の文脈に関連する下流トランスクリプトーム変化に関する機能ゲノミクス研究を支える。

CTDSPL2 CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ctdspl2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CTDSPL2 CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Ctdspl2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCtdspl2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CTDSPL2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCtdspl2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCTDSPL2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCtdspl2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCTDSPL2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。