CTAGE5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406164

Panoramica

CTAGE5 (noto anche come MIA2) codifica un componente associato alla membrana della macchina di esportazione dal reticolo endoplasmatico (RE), che supporta il traffico dipendente da COPII e l’organizzazione dei siti di uscita dal RE. Coordinando il caricamento del carico e la formazione delle vescicole, CTAGE5 contribuisce a una secrezione efficiente e al mantenimento della proteostasi del RE, processi strettamente collegati alla risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response, UPR) e alla segnalazione dello stress del RE. L’alterazione della funzione di CTAGE5 può modificare il flusso della via secretoria, influire sulla gestione intracellulare delle proteine e rimodellare le risposte cellulari allo stress metabolico o infiammatorio. Nella biologia umana, queste vie vengono spesso studiate in contesti in cui la capacità secretoria e l’omeostasi del RE influenzano fenotipi rilevanti per la malattia, inclusi l’adattamento delle cellule tumorali e la segnalazione correlata al sistema immunitario.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CTAGE5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MIA2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MIA2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MIA2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CTAGE5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MIA2 per lo studio della segnalazione di CTAGE5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MIA2 critici per la funzione di CTAGE5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MIA2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CTAGE5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CTAGE5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MIA2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CTAGE5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CTAGE5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MIA2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MIA2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.