CTAGE5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406164

Visão geral

CTAGE5 (também conhecido como MIA2) codifica um componente associado à membrana da maquinaria de exportação do retículo endoplasmático (RE) que dá suporte ao tráfego dependente de COPII e à organização dos sítios de saída do RE. Ao coordenar o carregamento de cargas e a formação de vesículas, o CTAGE5 contribui para uma secreção eficiente e para a manutenção da proteostase do RE, processos intimamente ligados à resposta a proteínas mal dobradas (UPR) e à sinalização de estresse do RE. A disfunção do CTAGE5 pode alterar o fluxo da via secretora, afetar o processamento intracelular de proteínas e remodelar as respostas celulares ao estresse metabólico ou inflamatório. Na biologia humana, essas vias são frequentemente investigadas em contextos em que a capacidade secretora e a homeostase do RE influenciam fenótipos relevantes para doenças, incluindo a adaptação de células tumorais e a sinalização relacionada ao sistema imune.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CTAGE5 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MIA2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MIA2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MIA2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CTAGE5.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MIA2 para a investigação da sinalização de CTAGE5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MIA2 críticos para a função CTAGE5
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MIA2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CTAGE5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CTAGE5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MIA2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CTAGE5 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CTAGE5 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MIA2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MIA2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.