CT45-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416782-ACT

CT45A1 codifica CT45-1, um antígeno câncer/testículo com expressão altamente restrita em tecidos normais adultos e reexpressão frequente em múltiplos contextos tumorais, o que o torna um marcador útil para estudar desregulação epigenética e transcrição inadequada à linhagem. Embora sua função molecular precisa ainda não esteja completamente definida, CT45-1 tem sido associado a programas transcricionais ligados à plasticidade celular e a estados adaptativos ao estresse, incluindo processos que sustentam a proliferação e a sobrevivência sob sinalização oncogênica. A expressão aberrante de CT45A1 é comumente associada à imunogenicidade e à heterogeneidade tumoral, e frequentemente é estudada em conjunto com outros antígenos restritos à linhagem germinativa que refletem estados de cromatina alterados. Essas características tornam CT45A1/CT45-1 relevante para investigar circuitos regulatórios que conectam remodelamento de cromatina, controle transcricional e expressão de antígenos associados a tumores.

CT45-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CT45A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CT45-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CT45A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CT45A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CT45-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CT45A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CT45-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CT45-1 em células tumorais com expressão de CT45A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.