CstF-64T CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406358

概要

CSTF2TはCstF-64Tをコードしており、CstF-64Tはpre-mRNAの3′末端形成とポリ(A)付加を誘導するcleavage stimulation factor（CstF）複合体のRNA結合性サブユニットです。切断部位の選択や選択的ポリ(A)付加に影響を与えることで、CstF-64Tは転写産物アイソフォームの多様性、mRNAの安定性、翻訳制御に寄与し、その下流で細胞状態や分化プログラムに影響を及ぼします。この活性は特に生殖系列の文脈や、3′UTR長の変化が転写後制御を再編するモデルにおいて重要です。CSTF2Tに関連する経路を含む切断・ポリ(A)付加機構の破綻は、がん研究や発生生物学で検討される増殖性・ストレス適応表現型に見られる広範な遺伝子発現変化と関連しています。

CstF-64T CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCSTF2T遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CSTF2T内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CSTF2Tのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CstF-64Tタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CstF-64Tシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CSTF2T欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CstF-64Tの機能に不可欠なCSTF2Tエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CSTF2Tゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CstF-64T CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCstF-64T CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CSTF2T遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CstF-64T HDRプラスミド（h）および CstF-64T HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCSTF2Tホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCSTF2T標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。