CSN8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-430844-ACT

Mouse Cops8 codifica a CSN8, uma subunidade central do signalossoma COP9 que coordena a atividade das ligases de ubiquitina do tipo cullin-RING por meio da regulação do estado de neddilação das cullinas. Ao ajustar a proteostase dependente de ubiquitina, a CSN8 influencia a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e programas de sinalização adaptativos ao estresse que se cruzam com a autofagia e vias inflamatórias. Alterações na função do signalossoma COP9 têm sido associadas à desregulação do turnover proteico e do controle transcricional em modelos de homeostase tecidual e em processos neurodegenerativos e oncogênicos. Assim, Cops8 é amplamente utilizado para investigar como a dinâmica do sistema ubiquitina–proteassoma molda a fidelidade da sinalização e a viabilidade celular in vivo e em células murinas cultivadas.

CSN8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cops8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CSN8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cops8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cops8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CSN8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cops8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CSN8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CSN8 em células tumorais com expressão de Cops8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.