Plasmide CRISPR d'Activation (h) CSN6: sc-404057-ACT

Le gène humain COPS6 code CSN6, une sous-unité centrale du signalosome COP9 qui régule les ligases E3 ubiquitine de type cullin-RING (CRL) en contrôlant la dynamique de neddylation et de déneddylation des cullines. En modulant l’activité des CRL, CSN6 influence la protéostasie dépendante de l’ubiquitine, la progression du cycle cellulaire, la signalisation des dommages à l’ADN et des programmes transcriptionnels sensibles au stress. CSN6 a été associée à une stabilité altérée de protéines régulatrices clés, reliant la fonction du signalosome COP9 à des réseaux de signalisation oncogéniques ainsi qu’à d’autres troubles caractérisés par une dégradation protéique perturbée. Ces propriétés font de COPS6 une cible pertinente pour étudier les interactions entre le système ubiquitine–protéasome, la transduction du signal et la régulation associée à la chromatine.

CSN6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COPS6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CSN6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COPS6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COPS6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CSN6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COPS6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CSN6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CSN6 dans les cellules tumorales présentant une expression de COPS6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.