Csk CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419846

概要

Csk（C末端Srcキナーゼ）は細胞質に存在するチロシンキナーゼで、SrcファミリーキナーゼのC末端にある調節性チロシン残基をリン酸化し、自己抑制型の立体構造を維持させることで下流シグナル伝達を抑制する。Src依存性経路を調整することにより、Cskは受容体近傍のシグナル伝達、フォーカルアドヒージョンの動態、細胞骨格リモデリング、ならびに多様な細胞種における免疫受容体シグナルの閾値に影響を与える。マウスモデルでは、Csk活性の変化がリンパ球の活性化と免疫寛容を攪乱し、異常なSrcキナーゼ活性化を介して炎症や腫瘍化シグナルに関連する過程にも影響を及ぼす。その結果、Cskは成長因子および免疫シグナルを、細胞接着・遊走・増殖プログラムへと結び付ける中心的な負の制御因子として広く研究されている。

Csk CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCsk遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Csk内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cskのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Cskタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Cskシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Csk欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Cskの機能に不可欠なCskエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cskゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Csk CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCsk CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Csk遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Csk HDRプラスミド（m）および Csk HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCskホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCsk標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。