cryptdin 25 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419983

概要

Defa25 は cryptdin 25 をコードしており、cryptdin 25 はマウスのパネート細胞由来の α-ディフェンシンです。腸管内腔で広範な抗菌活性を発揮することで、粘膜表面における自然免疫に寄与します。分泌性のカチオン性ペプチドとして、cryptdin 25 は宿主―微生物叢の相互作用の形成に関与し、上皮バリアの恒常性を支えるとともに、抗菌エフェクター機能を炎症シグナル伝達や微生物センサー経路と結び付けます。ディフェンシン発現の変化やパネート細胞機能不全は、腸内ディスバイオーシスや慢性炎症状態の文脈で頻繁に研究されており、抗菌ペプチドのプロファイル変化が腸管感染や粘膜炎症への感受性に影響し得ます。そのため Defa25 は、腸管免疫の機序解析、上皮―微生物クロストーク、ならびに腸陰窩における系譜特異的な分泌プログラムの研究に関連する遺伝子です。

cryptdin 25 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDefa25遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Defa25内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Defa25のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、cryptdin 25タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、cryptdin 25シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Defa25欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• cryptdin 25の機能に不可欠なDefa25エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Defa25ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• cryptdin 25 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびcryptdin 25 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Defa25遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  cryptdin 25 HDRプラスミド（m）および cryptdin 25 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDefa25ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDefa25標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。