Plásmido Doble Nickase (h) CRP: sc-401767-NIC

La proteína C reactiva (PCR) es una molécula de reconocimiento de patrones de la familia de las pentraxinas, producida predominantemente por los hepatocitos en respuesta a citocinas proinflamatorias, especialmente la IL-6, y circula como uno de los principales reactantes de fase aguda. La PCR se une a la fosfocolina y a otros ligandos en células dañadas y en superficies microbianas, promoviendo la opsonización y la activación de la cascada clásica del complemento a través de C1q. Mediante estos procesos de la inmunidad innata, la PCR integra la señalización inflamatoria con la eliminación mediada por el complemento y modula las interacciones con los receptores Fcγ en células mieloides. La variación genética y la expresión desregulada de la PCR se estudian ampliamente en el contexto de la inflamación sistémica y de fenotipos cardiometabólicos y asociados a enfermedades autoinmunes, lo que la convierte en una lectura molecular clave y en un regulador central en la biología de la inflamación.

CRP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CRP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CRP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CRP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CRP alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.