CRMP-5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-406365-NIC

DPYSL5は、セマフォリン依存性シグナル伝達および細胞骨格リモデリングに関与する細胞質リン酸化タンパク質であるコラプシン応答メディエータータンパク質5（CRMP-5）をコードしています。CRMP-5は、上流のキナーゼと微小管・アクチンのダイナミクスを結び付けることで、神経突起の伸長、神経細胞の極性形成、ならびに誘導シグナルに関与するとされています。軸索ナビゲーションやシナプス構築を制御する経路と統合的に働くことにより、DPYSL5は神経系および神経内分泌系の文脈で、細胞移動や分化プログラムに影響を与え得ます。CRMPファミリーの制御異常は、神経発達障害および神経変性の表現型、さらに腫瘍随伴性の神経自己免疫とも関連付けられており、DPYSL5は神経系機能不全の機序研究における有用な標的であることが示唆されます。

CRMP-5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DPYSL5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DPYSL5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DPYSL5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DPYSL5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。