Crk II Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419806-ACT

O gene **Crk** de camundongo codifica a **Crk II**, uma proteína adaptadora com domínios **SH2/SH3** que acopla receptores e proteínas de “scaffold” fosforilados em tirosina a efetores a jusante que controlam a adesão celular, a migração e a remodelação do citoesqueleto. Por meio de interações com proteínas como **paxilina**, **p130CAS/BCAR1**, **C3G/RapGEF1** e **GEFs da família DOCK**, a Crk II ajuda a coordenar a sinalização de **integrinas** e de **fatores de crescimento**, influenciando a dinâmica/renovação das adesões focais e vias de **MAPK** e de **pequenas GTPases**. A sinalização dependente de Crk é frequentemente estudada em contextos de dinâmica epitélio–mesênquima, fenótipos associados à invasão e fosforilação responsiva ao estresse que modula a montagem de complexos de adaptadores. Assim, alterações na atividade da rede de **CRK** são relevantes para pesquisas mecanísticas sobre sinalização oncogênica, remodelamento tecidual e comportamentos celulares associados à metástase, sem implicar desfechos clínicos.

Crk II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Crk sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Crk II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Crk em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Crk, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Crk II. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Crk nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Crk II no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Crk II em células tumorais com expressão de Crk silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.