creatine kinase-M Plasmide Double Nickase (h): sc-401132-NIC

CKM codifica la creatina chinasi di tipo muscolare (creatina chinasi-M), una fosfotransferasi citosolica che catalizza il trasferimento reversibile di fosfato tra ATP e creatina, fungendo da tampone e rigenerando rapidamente ATP quando la richiesta energetica fluttua. Questa reazione è centrale nella navetta della fosfocreatina e collega glicolisi e fosforilazione ossidativa al consumo di ATP da parte delle miofibrille, sostenendo la contrazione muscolare e, più in generale, l’omeostasi energetica cellulare. L’attività di CKM contribuisce al metabolismo di creatina/fosfageni ed è comunemente utilizzata come readout biochimico e molecolare negli studi sulla differenziazione del muscolo scheletrico, sulle risposte allo stress e sulla funzione mitocondriale. Una segnalazione della creatina chinasi deregolata e un’espressione alterata di CKM sono state associate a danno muscolare e perturbazioni metaboliche, rendendolo un bersaglio rilevante per indagini meccanicistiche sulle miopatie e su fenotipi correlati a deficit energetici.

creatine kinase-M Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CKM nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CKM. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CKM. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CKM interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.