creatine kinase-M Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-401132-KO-2

Visão geral

CKM codifica a creatina quinase M (CK‑M), uma fosfotransferase citosólica que catalisa a transferência reversível de um grupo fosfato da fosfocreatina para o ADP, regenerando ATP e, assim, amortecendo a carga energética celular durante variações de demanda. Altamente enriquecida no músculo esquelético e cardíaco, a CK‑M sustenta a homeostase de ATP em acoplamento com a glicólise, a fosforilação oxidativa e o transporte de energia mediado pela lançadeira de fosfocreatina nas fibras musculares. A perturbação da atividade de CKM afeta a contratilidade muscular e as respostas ao stress metabólico e é frequentemente avaliada em estudos de miopatias, lesão muscular e remodelação cardiometabólica. O CKM também serve como um nó mecanístico para investigar adaptação energética, função mitocondrial e sinalização ligada ao estado redox em modelos de músculo estriado.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO creatine kinase-M (h2) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CKM em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CKM, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CKM na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína creatine kinase-M.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CKM para a investigação da sinalização de creatine kinase-M, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CKM críticos para a função creatine kinase-M
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CKM para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo creatine kinase-M Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo creatine kinase-M Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CKM. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo creatine kinase-M Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR creatine kinase-M (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CKM para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CKM definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.