CPSF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405273-ACT

A CPSF1 humana (fator de especificidade de clivagem e poliadenilação, subunidade 1) é um componente central da maquinaria de processamento da extremidade 3′ que reconhece sinais de poliadenilação e coordena a clivagem do pré‑mRNA e a adição da cauda poli(A). Ao acoplar a terminação da transcrição à maturação do RNA, a CPSF1 ajuda a regular a estabilidade do mRNA, a exportação nuclear e a tradução, moldando assim programas globais de expressão gênica. A disrupção do controle de clivagem e poliadenilação pode alterar padrões de poliadenilação alternativa e redes regulatórias a jusante, processos frequentemente implicados em sinalização proliferativa e vias de resposta ao estresse. Como um nó central no processamento de RNA, a CPSF1 é amplamente estudada no contexto da regulação transcricional, do controle do ciclo celular e da remodelação do transcriptoma associada a doenças.

CPSF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CPSF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CPSF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CPSF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CPSF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CPSF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CPSF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CPSF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CPSF1 em células tumorais com expressão de CPSF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.