Cox-2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400072-LAC

PTGS2 codifica a ciclo-oxigenase-2 (COX-2), uma enzima induzível e limitante da velocidade que converte o ácido araquidónico em prostaglandina H2, controlando assim a biossíntese subsequente de prostaglandinas e tromboxanos. A expressão de COX-2 é rapidamente aumentada por citocinas inflamatórias, fatores de crescimento e sinais microbianos por meio de vias que incluem NF-κB, MAPK e JAK/STAT, ligando programas transcricionais dependentes do estímulo à produção de mediadores lipídicos. Ao moldar a sinalização mediada por prostaglandinas, a COX-2 influencia o tónus vascular, as interações plaqueta–endotélio, as respostas de dor e febre e a remodelação tecidular. A atividade desregulada de PTGS2/COX-2 é amplamente utilizada como um indicador molecular em modelos de inflamação crónica, inflamação associada a tumores, neuroinflamação e fisiopatologia cardiovascular.

As Partículas de Ativação Lentivirais Cox-2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PTGS2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Cox-2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PTGS2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Cox-2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PTGS2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.