Cox-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400072-ACT

PTGS2 codifica a ciclo-oxigenase-2 (Cox-2), uma enzima induzível associada ao retículo endoplasmático e ao envelope nuclear que converte o ácido araquidónico em prostaglandina H2, o precursor comprometido de diversos prostanoides. A Cox-2 é rapidamente sobre-regulada por citocinas inflamatórias, fatores de crescimento e estímulos oncogénicos, e integra sinalização de NF-κB, MAPK/ERK, JAK/STAT e AP-1 para modular programas génicos inflamatórios. Por meio da prostaglandina E2 e de mediadores lipídicos relacionados, PTGS2 influencia o tónus vascular, a função plaquetária, as respostas de dor e febre, a remodelação da barreira epitelial e o recrutamento de células imunitárias. A expressão desregulada de PTGS2 é frequentemente observada na inflamação crónica e em múltiplos contextos de cancro, onde está associada a alterações na proliferação celular, na sinalização angiogénica e em mecanismos de evasão imunitária.

Cox-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTGS2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cox-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTGS2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTGS2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cox-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTGS2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cox-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cox-2 em células tumorais com expressão de PTGS2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.