connexin 46 Plasmide Double Nickase (h): sc-403947-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- connexin 46 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il connexin 46 Double Nickase Plasmid (h) e il connexin 46 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GJA3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: connexin 46 Antibody (C-3): sc-365394
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
connexin 46 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403947-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
connexin 46 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403947-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GJA3 codifica per la connessina 46, una proteina delle gap junction arricchita nel cristallino che si assembla in emicanali e canali intercellulari per mediare il trasferimento diretto cellula–cellula di ioni e piccoli metaboliti. La connessina 46 supporta la differenziazione e l’omeostasi delle cellule delle fibre del cristallino contribuendo al sistema di microcircolazione del cristallino, coordinando l’equilibrio redox e mantenendo l’equilibrio ionico e osmotico. Attraverso la regolazione della comunicazione giunzionale e della permeabilità degli emicanali, influenza la gestione del calcio, la segnalazione mediata da ATP e le risposte cellulari allo stress nel tessuto oculare avascolare. L’alterazione della funzione di GJA3 è associata a fenotipi di cataratta ereditaria, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio dei meccanismi di trasparenza del cristallino e del controllo di qualità delle proteine nell’ambiente oculare.
connexin 46 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GJA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GJA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GJA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GJA3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.