COL6A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401069

Panoramica

COL6A1 codifica la catena alfa 1 del collagene di tipo VI, un componente fondamentale delle microfibrille di collagene VI che si assemblano nella matrice extracellulare e contribuiscono alla resistenza alla trazione dei tessuti e all’adesione cellula–matrice. Le reti di collagene VI coordinano l’organizzazione della matrice extracellulare e influenzano la meccanotrasduzione, i segnali di sopravvivenza e la differenziazione cellulare nei tessuti connettivi, con collegamenti funzionali alle vie mediate dalle integrine e alla stabilità della membrana basale. Un’alterazione dell’espressione di COL6A1 o della sua incorporazione nella matrice può perturbare il rimodellamento della matrice extracellulare e l’architettura dello stroma, influenzando l’integrità delle miofibre e il comportamento dei fibroblasti. La disregolazione del collagene VI è stata associata a fenotipi neuromuscolari e del tessuto connettivo ed è inoltre studiata nel contesto della fibrosi e del rimodellamento della matrice associato ai tumori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COL6A1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene COL6A1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del COL6A1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto COL6A1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COL6A1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di COL6A1 per lo studio della segnalazione di COL6A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni COL6A1 critici per la funzione di COL6A1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di COL6A1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COL6A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal COL6A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus COL6A1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COL6A1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR COL6A1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia COL6A1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio COL6A1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.