COL4A2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401462-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- COL4A2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- COL4A2ダブルニカースプラスミド（h）およびCOL4A2ダブルニカースプラスミド（h2）は、COL4A2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
COL4A2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401462-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL4A2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401462-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL4A2 は、基底膜の主要な構造要素である IV 型コラーゲンの α2 鎖をコードしており、COL4A1/COL4A2 のヘテロ三量体を形成して、さらに高次の IV 型コラーゲンネットワークへと組み上がります。この細胞外マトリックスの足場は、組織構築を支えるとともに、透過性を調節し、インテグリン依存性およびマトリックス依存性の経路を介して細胞接着・遊走・分化に影響するシグナル伝達の微小環境を整えます。COL4A2 は基底膜形成と血管の健全性維持において中心的な役割を担い、その変異は小血管病変や基底膜異常症と関連し、とりわけ脳血管および眼の症状が顕著にみられます。発生過程から組織特異的な機能まで幅広い役割をもつマトリックス遺伝子として、COL4A2 は内皮細胞生物学、神経血管ユニット機能、細胞外マトリックスのリモデリングの研究でしばしば取り上げられます。
COL4A2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における COL4A2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、COL4A2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、COL4A2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、COL4A2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。