COL4A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419744

Übersicht

Col4a2 kodiert die α2‑Kette des Kollagens Typ IV (COL4A2), eine zentrale Strukturkomponente von Basalmembranen, die zusammen mit anderen Kollagen‑IV‑Ketten ein heterotrimeres Netzwerk bildet und so die Gewebearchitektur stützt. Dieses Gerüst der extrazellulären Matrix reguliert Zelladhäsion, Migration und Polarität und beeinflusst die Signalvernetzung mit Integrinen sowie Wachstumsfaktor‑Signalwegen, die an Gefäßstabilität und Organentwicklung beteiligt sind. Eine veränderte COL4A2‑Funktion wird mit einer Fragilität der Basalmembran und Pathologien der kleinen Gefäße in Verbindung gebracht und ist daher relevant für Untersuchungen zur zerebrovaskulären Integrität, zur Augenentwicklung und zu Filtrationsbarrieren der Niere. In Mausmodellen bietet Col4a2 einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um matrixgetriebene Mechanismen zu untersuchen, die das Verhalten von Endothel- und Epithelzellen beeinflussen.

Das COL4A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Col4a2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Col4a2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Col4a2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die COL4A2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Col4a2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der COL4A2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Col4a2-Exone abzielen, die für die COL4A2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Col4a2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom COL4A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom COL4A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Col4a2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das COL4A2 HDR-Plasmid (m) und COL4A2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Col4a2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Col4a2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.