COL2A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400359-NIC

COL2A1 codifica la catena α1 del collagene di tipo II, un importante collagene fibrillare della cartilagine ialina e della colonna vertebrale in sviluppo. L'assemblaggio della sua matrice extracellulare sostiene la differenziazione dei condrociti, la biomeccanica tissutale e la fibrillogenesi del collagene, integrandosi con reti ricche di proteoglicani per mantenere l'integrità della cartilagine. L'espressione e la maturazione di COL2A1 si intersecano con le vie di rimodellamento della matrice, inclusa la regolazione da parte di programmi condrogenici guidati da SOX9 e il feedback della segnalazione della famiglia TGF-β. La variabilità genetica o la disfunzione di COL2A1 è associata a displasie scheletriche ereditarie e a una degenerazione cartilaginea rilevante per l'osteoartrosi, rendendolo un bersaglio frequente nella ricerca sulla biologia muscoloscheletrica e della matrice extracellulare.

COL2A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COL2A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COL2A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COL2A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COL2A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.