COL1A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400598

概要

COL1A2 は、I 型コラーゲンのプロα2鎖をコードする遺伝子であり、I 型コラーゲンは主要な線維性コラーゲンとしてヘテロ三量体を形成し、結合組織に引張強度を与えます。分泌後に細胞外でプロセシングを受けた I 型コラーゲンは細胞外マトリックス（ECM）に取り込まれ、インテグリンおよびディスコイジン・ドメイン受容体（DDR）依存性シグナル伝達を介して、組織構築やメカノトランスダクションを調節します。COL1A2 の発現とコラーゲン線維形成は、TGF-β シグナル伝達、マトリックスメタロプロテアーゼ活性、線維芽細胞の活性化プログラムなどを含む ECM リモデリング経路と相互に関わっています。COL1A2 の制御異常は、マトリックスの硬さの変化や異常なコラーゲン沈着に寄与し、遺伝性結合組織疾患や線維化リモデリングの文脈に関与するとされています。

COL1A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCOL1A2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、COL1A2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、COL1A2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、COL1A2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、COL1A2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、COL1A2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• COL1A2の機能に不可欠なCOL1A2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、COL1A2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• COL1A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCOL1A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、COL1A2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  COL1A2 HDRプラスミド（h）および COL1A2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCOL1A2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCOL1A2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。