COL1A1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400064-NIC

COL1A1 は、細胞外マトリックス（ECM）の主要な構造要素である I 型コラーゲンのプロα1鎖をコードしており、線維性コラーゲンとして集合して結合組織に引張強度を与えます。その生合成と成熟には、小胞体（ER）でのプロセシング、プロリン／リシンの水酸化、三重らせん形成、分泌、ならびに細胞外での線維形成（フィブリロジェネシス）が関与し、COL1A1 は ECM の組織化、細胞—マトリックス接着、組織リモデリングの経路と結び付いています。COL1A1 の発現は線維芽細胞の活性化プログラムと密接に連動しており、マトリックス沈着と創傷修復を協調させる TGF-β などのシグナル入力の影響を強く受けます。COL1A1 の遺伝的または制御上の攪乱は、結合組織および骨格の表現型と関連し、線維化や腫瘍微小環境のリモデリングの文脈で広く研究されています。

COL1A1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における COL1A1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、COL1A1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、COL1A1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、COL1A1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。