COL17A1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402747-ACT

ヒトのCOL17A1は、コラーゲンXVII型α1をコードしており、膜貫通型のヘミデスモソーム関連コラーゲン（BP180）として、細胞外マトリックス成分と細胞内のケラチン中間径フィラメントを連結することで、基底ケラチノサイトを基底膜へ固定します。これは表皮の接着、真皮–表皮接合部の完全性、ならびに上皮組織の恒常性を支え、細胞–マトリックス間シグナル伝達、機械的安定性、創傷に伴うリモデリングなどの過程に影響します。COL17A1の機能は、ヘミデスモソームの組み立ておよび基底膜の構築経路と密接に関連しており、その下流で上皮バリアの維持にも影響を及ぼします。COL17A1の発現異常や構造的完全性の変化は、水疱形成を伴う皮膚表現型や自己抗原に関連した皮膚病態と関連しており、上皮接着や皮膚生物学の研究において重要な標的となります。

COL17A1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性COL17A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

COL17A1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における COL17A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCOL17A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性COL17A1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCOL17A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCOL17A1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCOL17A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCOL17A1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。