Plasmide Double Nickase (h) Cofilin 2: sc-401512-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Cofilin 2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Cofilin 2 Double Nickase (h) et le plasmide Cofilin 2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CFL2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Cofilin 2 Antibody (D-5): sc-166958
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Cofilin 2 | sc-401512-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Cofilin 2 | sc-401512-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CFL2 code la cofiline 2, une protéine liant l’actine qui régule le renouvellement des filaments en favorisant la coupure et la dépolymérisation de l’actine filamentaire (F-actine), façonnant ainsi la dynamique du cytosquelette nécessaire à la contractilité et à la morphologie cellulaire. Dans le muscle strié, la cofiline 2 contribue à l’organisation du sarcomère et au maintien des myofibrilles grâce à un contrôle coordonné du remodelage de l’actine et des interactions actine–myosine. L’activité de CFL2 s’intègre aux réseaux de signalisation de l’actine en aval des GTPases de la famille Rho et aux voies de phosphorégulation qui ajustent la stabilité des filaments d’actine. La perturbation de la fonction de CFL2 a été associée à des phénotypes neuromusculaires et myopathiques caractérisés par une architecture myofibrillaire altérée, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’homéostasie musculaire et des mécanismes de maladie liés au cytosquelette.
Cofilin 2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CFL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CFL2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CFL2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CFL2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.