CLTCL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401887-ACT

O gene humano CLTCL1 codifica a clatrina de cadeia pesada tipo 1 (CHC22), uma proteína de revestimento da família da clatrina que se monta em redes para moldar membranas e impulsionar a formação de vesículas no tráfego endocítico e pós-Golgi. O CLTCL1 está particularmente implicado na triagem intracelular regulada de cargas, incluindo vias que controlam o sequestro e a reciclagem do GLUT4, ligando-o à homeostase da glicose e às respostas ao estresse metabólico. Por meio da coordenação com proteínas adaptadoras e com a maquinaria do citoesqueleto, o CLTCL1 influencia a seletividade de cargas, a maturação de vesículas e a organização espacial dos compartimentos de tráfego. A desregulação do tráfego mediado por clatrina e da reciclagem de cargas envolvendo o CLTCL1 tem sido associada a fenótipos metabólicos e é relevante para estudos de transporte responsivo à insulina, dinâmica de membranas e desfechos de sinalização celular.

CLTCL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CLTCL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CLTCL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CLTCL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CLTCL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CLTCL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CLTCL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CLTCL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CLTCL1 em células tumorais com expressão de CLTCL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.