CLN2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405204

概要

TPP1はトリペプチジルペプチダーゼ1（CLN2）をコードしており、リソソーム内でのタンパク質代謝回転の過程で、ポリペプチドのN末端からトリペプチドを切り出すリソソーム局在性のセリンプロテアーゼである。CLN2活性は、オートファジー–リソソームフラックス、エンドリソソーム輸送、ならびに代謝的に活発な細胞種におけるプロテオスタシス維持と交差する、リソソーム依存的な分解（異化）過程を支えている。TPP1機能の喪失はリソソームでのタンパク質分解を障害し、神経細胞の脆弱性に寄与する。病原性バリアントは、CLN2関連神経セロイドリポフスチン症や、より広範なリソソーム蓄積症病態と関連している。そのためTPP1/CLN2は、リソソーム機能、ストレス応答、分解障害が細胞機能不全へ結び付く機構を解明するモデルで広く研究されている。

CLN2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTPP1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TPP1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TPP1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CLN2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CLN2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TPP1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CLN2の機能に不可欠なTPP1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TPP1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CLN2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCLN2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TPP1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CLN2 HDRプラスミド（h）および CLN2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTPP1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTPP1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。