CLEC-2D Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412035-ACT

CLEC2D codifica a CLEC-2D, um ligante do tipo lectina C expresso na superfície celular que modula o reconhecimento imunitário por meio de interações com recetores de células NK, particularmente NKG2D e CD161 (KLRB1). Ao moldar a sinalização ativadora e inibitória na sinapse imunitária, a CLEC-2D influencia a citotoxicidade das células NK, a libertação de citocinas e a vigilância imunitária mais ampla em microambientes inflamatórios e associados a tumores. A sua expressão é regulada de forma dinâmica pelo stress celular e por estados de diferenciação, ligando o CLEC2D a vias que controlam a evasão imunitária, o crosstalk entre leucócitos e a homeostase dos tecidos. Foram descritas alterações nos níveis de CLEC2D em múltiplas neoplasias e condições imunomediadas, sustentando a sua utilização como uma ferramenta molecular para estudar escape imunitário, citotoxicidade independente de antigénio e fenótipos imunorreguladores.

CLEC-2D O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CLEC2D sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CLEC-2D O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CLEC2D em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CLEC2D, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CLEC-2D. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CLEC2D nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CLEC-2D no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CLEC-2D em células tumorais com expressão de CLEC2D silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.