CKR-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402252-ACT

CCR2 codifica per il recettore chemiokinico CKR-2, un GPCR a sette eliche transmembrana che lega CCL2/MCP-1 e altre chemochine CC correlate per coordinare la chemiotassi dei leucociti e il traffico verso i tessuti. La segnalazione di CCR2 attiva vie dipendenti da Gαi che modulano i flussi intracellulari di calcio, le cascate MAPK e la segnalazione PI3K/AKT, plasmando l’espressione genica infiammatoria e gli stati di attivazione delle cellule mieloidi. Nella biologia umana, CCR2 è un regolatore chiave del reclutamento dei monociti e della polarizzazione dei macrofagi, influenzando l’infiammazione vascolare, il rimodellamento fibrotico e i processi neuroinfiammatori. Un’attività CCR2 disregolata e un’infiltrazione alterata di cellule CCR2+ sono frequentemente studiate nel cancro, nell’aterosclerosi, nelle malattie autoimmuni e nelle condizioni infiammatorie croniche.

CKR-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CCR2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CKR-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CCR2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CCR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CKR-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CCR2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CKR-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CKR-2 nelle cellule tumorali con espressione di CCR2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.