CIS CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402619-ACT

ヒトCISHは、サイトカイン誘導性SH2ドメイン含有タンパク質（CIS）をコードしており、リン酸化された標的に結合してユビキチン依存的な分解を促進することで、サイトカイン受容体シグナル伝達を減弱させるSOCSファミリーのアダプター分子です。CISは、IL-2ファミリーサイトカイン受容体および関連する免疫調節シグナルの下流にあるJAK/STAT経路において、負のフィードバック制御因子として働き、リンパ球の活性化、増殖、分化を調整します。CISはSH2ドメインとSOCSボックスを介して、より広範な炎症プログラムや増殖制御プログラムとも交差する形で、シグナルの強度と持続時間に影響を与えます。CISH発現やCIS活性の異常は、免疫応答性の変化や炎症性疾患の病態と関連づけられており、サイトカインシグナル伝達ネットワークの機構解明研究における有用なノードとなっています。

CIS CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CISHの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CIS CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CISH 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCISH転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CISの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCISH遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCIS依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCISH発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCIS経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。