CIITA Double Nickaseプラスミド (h): sc-401762-NIC

CIITA（class II major histocompatibility complex transactivator）は、抗原提示細胞におけるMHCクラスII遺伝子発現のマスター制御因子であり、HLA-DP、HLA-DQ、HLA-DR各座位の転写を統合的に調節します。CIITAはDNAに直接結合しない共役活性化因子（coactivator）として働き、インターフェロンγをはじめとする炎症性経路からのシグナルを統合して、RFXやNF-Yなどの因子とともにエンハンセオソームを形成し、さらにクロマチン修飾機構をリクルートします。抗原処理・提示プログラムの制御を通じて、CIITAはCD4+ T細胞のプライミングと免疫監視を形作り、CIITA活性の変化は免疫恒常性の破綻や腫瘍の免疫回避と関連づけられています。CIITA依存的な転写ネットワークの異常は、炎症性・自己免疫性の表現型や宿主—病原体相互作用の文脈でも研究されています。

CIITA ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CIITA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CIITA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CIITAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CIITAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。