CIDE-A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405086-ACT

CIDEA (efetor A semelhante a DFFA indutor de morte celular) codifica a proteína CIDE-A associada a gotículas lipídicas, um regulador-chave do armazenamento de lipídios neutros e do metabolismo de adipócitos. Em programas humanos relacionados ao tecido adiposo e à gordura marrom/bege, a CIDE-A favorece o crescimento e a remodelação das gotículas lipídicas e influencia o turnover de triglicerídeos, acoplando a dinâmica de armazenamento de lipídios à atividade mitocondrial e às redes gênicas termogênicas. A expressão e a função de CIDEA estão intimamente ligadas a vias de homeostase energética, incluindo adipogênese e processos de manejo de lipídios, e têm sido associadas a fenótipos metabólicos como obesidade, resistência à insulina e desregulação lipídica relacionada à esteatose hepática. Como um efetor metabólico dependente de tecido e de estado, a CIDE-A é frequentemente estudada por seus papéis na diferenciação de adipócitos, na biologia de gotículas lipídicas e em respostas ao estresse em células metabolicamente ativas.

CIDE-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CIDEA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CIDE-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CIDEA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CIDEA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CIDE-A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CIDEA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CIDE-A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CIDE-A em células tumorais com expressão de CIDEA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.