ChemR23 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403033-ACT

CMKLR1はChemR23をコードするGタンパク質共役受容体（GPCR）であり、ケメリン（RARRES2）および炎症収束を促進する脂質メディエーターであるレゾルビンE1に結合して、白血球の走化性、接着、ならびに自然免疫の活性化を調節する。ChemR23シグナルはGi依存性経路を介してcAMPや細胞内カルシウム動態を制御し、さらに下流のMAPK/ERKおよびPI3Kプログラムを調整することで、炎症のトーンや組織リモデリングに影響を与える。CMKLR1軸はマクロファージおよび樹状細胞の移動、脂肪組織の生物学、血管応答に関与するとされ、受容体活性を慢性炎症状態と結び付けている。ChemR23の発現変化やリガンドの利用可能性の変動は、代謝性炎症、自己免疫疾患、腫瘍微小環境のダイナミクスと関連付けられており、ヒト細胞系における経路解析の対象として重要なノードとなっている。

ChemR23 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CMKLR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ChemR23 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CMKLR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCMKLR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ChemR23の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCMKLR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるChemR23依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCMKLR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるChemR23経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。