CHD5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402429-ACT

CHD5（クロモドメイン・ヘリカーゼDNA結合タンパク質5）は、SNF2ファミリーに属する神経系で高発現するATP依存性クロマチンリモデラーであり、分化やゲノム安定性に必要なヌクレオソーム配置と転写プログラムを統合的に制御します。CHD5は、クロモドメインおよびヘリカーゼ／ATPアーゼ活性を介して制御エレメントにおけるクロマチンのアクセス性を調節し、細胞周期進行、DNA損傷応答、系譜特異的遺伝子発現を制御するエピジェネティック経路と連携します。CHD5活性の低下は、転写制御の破綻や染色体不安定性と関連し、CHD5発現の変化は神経芽腫を含むさまざまながんにおいて腫瘍抑制ネットワークとの関連がしばしば報告されています。生物医学研究では、CHD5はクロマチンダイナミクス、神経発生、そしてエピジェネティックな制御異常が疾患関連表現型に寄与する機序の解明という観点から広く研究されています。

CHD5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CHD5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CHD5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CHD5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCHD5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CHD5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCHD5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCHD5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCHD5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCHD5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。