cGAS Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403354-ACT

A MB21D1 humana codifica a sintase de GMP-AMP cíclico (cGAS), um sensor citosólico de DNA que catalisa a síntese de 2′3′-cGAMP para ativar a sinalização via STING (TMEM173) e a subsequente ativação de TBK1–IRF3 e NF-κB. Essa via coordena programas transcricionais de interferon tipo I e pró-inflamatórios em resposta a DNA derivado de patógenos ou a DNA próprio mal localizado, conectando a imunidade inata às respostas a dano no DNA e ao estresse mitocondrial. A atividade desregulada do eixo cGAS–STING tem sido associada a fenótipos autoinflamatórios, sinalização inflamatória aberrante em câncer e senescência, e respostas alteradas a vírus de DNA, tornando a MB21D1 um nó central para o estudo de vigilância imunológica e inflamação estéril. A cGAS também influencia processos associados à cromatina e o reconhecimento de micronúcleos, apoiando estudos mecanísticos de ativação imune impulsionada por instabilidade genômica.

cGAS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MB21D1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cGAS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MB21D1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MB21D1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cGAS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MB21D1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cGAS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cGAS em células tumorais com expressão de MB21D1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.