cGAS Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403354-ACT

L’MB21D1 umano codifica la sintasi del GMP-AMP ciclico (cGAS), un sensore citosolico del DNA che catalizza la sintesi di 2′3′-cGAMP per attivare la segnalazione di STING (TMEM173) e la successiva attivazione di TBK1–IRF3 e NF-κB. Questa via coordina programmi trascrizionali di interferone di tipo I e proinfiammatori in risposta a DNA derivato da patogeni o a DNA endogeno erroneamente localizzato, collegando l’immunità innata con le risposte al danno al DNA e lo stress mitocondriale. Un’attività cGAS–STING disregolata è stata associata a fenotipi autoinfiammatori, a una segnalazione infiammatoria aberrante nel cancro e nella senescenza e a risposte alterate ai virus a DNA, rendendo MB21D1 un nodo chiave per lo studio della sorveglianza immunitaria e dell’infiammazione sterile. cGAS influenza anche processi associati alla cromatina e il riconoscimento dei micronuclei, supportando studi meccanicistici sull’attivazione immunitaria guidata dall’instabilità genomica.

cGAS Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MB21D1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

cGAS Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MB21D1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MB21D1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di cGAS. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MB21D1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da cGAS nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via cGAS nelle cellule tumorali con espressione di MB21D1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.