CDKL5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403409-NIC

CDKL5は、セリン／スレオニンキナーゼであるサイクリン依存性キナーゼ様5（cyclin-dependent kinase-like 5）をコードしており、神経系で高発現し、ニューロンの成熟、シナプス機能、ならびに活動依存的シグナル伝達を支えています。CDKL5は、クロマチンダイナミクス、遺伝子発現プログラム、細胞骨格の組織化に影響するリン酸化依存的な過程を制御し、神経突起の伸長やシナプス可塑性を司る経路と結び付いています。CDKL5の機能障害または機能低下は重篤な神経発達性の表現型と関連しているため、ニューロンにおけるキナーゼシグナル伝達の機序研究における重要な標的となっています。細胞モデルでは、CDKL5の摂動を用いて、リン酸化カスケードの変化が神経ネットワークの発達や刺激応答性の転写にどのような影響を及ぼすかを検討します。

CDKL5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDKL5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDKL5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDKL5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDKL5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。