Cdk7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400665-ACT

ヒトCDK7は、サイクリン依存性キナーゼ7（Cdk7）をコードしている。Cdk7は二重の機能をもつ酵素であり、CDK7–サイクリンH–MAT1複合体においてCDK活性化キナーゼ（CAK）として働くと同時に、一般転写因子TFIIHの中核構成要素としても機能する。RNAポリメラーゼIIのC末端ドメイン（CTD）をリン酸化し、さらに細胞周期CDKを活性化することで、Cdk7は転写開始、プロモーター近傍でのポーズ解除、そして秩序だった細胞周期進行を協調的に制御する。CDK7活性はDNA損傷応答シグナル伝達および転写共役ヌクレオチド除去修復と密接に統合されており、ゲノム維持を細胞運命の決定へと結び付けている。CDK7依存的な転写プログラムや細胞周期制御の破綻は、増殖状態やがん遺伝子性転写ネットワークの文脈でしばしば研究対象となるため、CDK7は機構解明のための経路解析において価値の高いハブ（ノード）とみなされている。

Cdk7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CDK7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Cdk7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CDK7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCDK7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Cdk7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCDK7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCdk7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCDK7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCdk7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。